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NIBSC 09/138 BCR-ABL1易位的定量标准品

NIBSC 09/138 BCR-ABL1易位的定量标准品

简要描述:NIBSC 09/138 BCR-ABL1易位的定量标准品包括四个单独编码的标准/安瓿,每个都包含冻干细胞。每个标准在国际标准 (BCR-ABLIS) 上对 BCR-ABL1 有不同的定义值,具体取决于使用的对照基因。

所属分类:NIBSC标准品

更新时间:2022-04-20

厂商性质:经销商

详情介绍
品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,生物产业

1. 预期用途

世界卫生组织(WHO;NIBSC 产品代码 09/138)的生物标准化专家委员会 (ECBS) 于 2009 年建立了第一个 WHO 国际遗传参考小组,用于定量 BCR-ABL1 mRNA [1]。该面板包括四个单独编码的标准/安瓿,每个都包含冻干细胞。每个标准在国际标准 (BCR-ABLIS) 上对 BCR-ABL1 有不同的定义值,具体取决于使用的对照基因。它们一起用作校准试剂盒、测定和二级标准的主要标准(参见第 7 节)。

这些材料不得用于任何其他用途。请注意,这些材料仅在国际标准 (IS) 的 0.01% 至 10% 范围内验证了 BCR-ABL1 mRNA 检测。它们尚未针对其他直接应用进行验证,例如IS 测量值 >10%,或直接确定测定灵敏度<0.01%,尽管这些可以通过衍生二级标准来确定(参见第 7 节)。这些材料包含 BCR-ABL1 e14a2 转录本(也称为 b3a2);应在使用前验证它们对最终用户分析中其他转录物(包括 BCR-ABL1 e13a2 (b2a2) 的量化)的适用性,例如通过确保对转录物进行同样有效的 PCR 扩增。



2. 注意

NIBSC 09/138 BCR-ABL1易位的定量标准品 不适用于人类食物链中的人类或动物。该制剂含有人类来源的材料。已通过 PCR 检测了它们的 HIV、HBV、HCV、CMV、EBV、HTLV-I/II、HHV-8 和支原体,但均未检测到。

对自由干燥材料的常规微生物学测试表明溶血性葡萄球菌污染,属于危险组 2。在 NIBSC 进行的实验表明,有机体在暴露于 Trizol(30-60% 苯酚)后被*杀死,这是 RNA 提取过程的第一步。与所有生物来源的材料一样,这种制剂应被视为对健康有潜在危害。它应该被使用和丢弃根据您自己实验室的安全程序。此类安全程序应包括戴防护手套和避免产生气溶胶。打开安瓿或小瓶时应小心谨慎,以免割伤。



3. 单元

该小组在一项涉及 10 个实验室的国际合作研究中进行了测试,并使用三种经常使用的对照基因为 4 种主要标准中的每一种获得了以下平均 BCR-ABL1IS 值。

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4. 内容

生物材料原产国:德国和英国。安瓿含有不同比例的冻干 K562 细胞(表达 BCR-ABL1 易位 e14a2,也称为 b3a2)和 HL60 细胞(BCR-ABL1 阴性)。每个安瓿的细胞总数约为 1.5 x 10e6。在冷冻干燥之前,将细胞悬浮在 2x PBS 中。

下表显示了每种材料的估计 RNA 产量。请注意,这些值仅供参考,不用于正式用途

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5。贮存

将所有未开封的安瓿瓶存放在 -20°C 或以下。请注意:由于冻干材料固有的稳定性,NIBSC 可能会在环境温度下运输这些材料。



6. 开瓶指南

DIN 安瓿瓶有一个“易开"颜色的压力点,窄的安瓿杆在此与较宽的安瓿瓶主体相连。各种类型的安瓿破碎机可商购获得。要打开安瓿,轻轻敲击安瓿以收集底部(标记)端的材料,并按照安瓿破碎器随附的制造商说明进行操作。




7. 材料的使用

NIBSC 09/138 BCR-ABL1易位的定量标准品  在重新配制之前,不应尝试称量冻干材料的任何部分。

在继续之前,请阅读第 3-5 页上的建议测定和二级标准校准方法。如果您要校准二级标准,请在与一级标准同时提取 RNA、制备 cDNA 和测试该 cDNA。这将使您能够确定二级标准的 IS 值。

a。如上文第 6 节所述打开安瓿瓶。

b。在室温下使用 1ml Trizol、600 µl RLTbuffer 或其他 RNA 提取系统的等价物重构每种冻干材料。

C。确保用移液器吸头或针头反复抽吸来裂解所有细胞。孵育 5 分钟。

d。将每个安瓿的全部内容物转移到无核酸酶管中。

e.使用常用方法从 4 种材料中的每一种中提取 RNA。

F。使用常用方法为 4 种 RNA 材料中的每一种制备 cDNA。 (如果按照建议的方法,从每种 RNA 材料中制备 2 批 cDNA;见第 3 页)。

G。使用常用方法确定 cDNA 材料的 % BCR-ABL1 / 对照基因值。

H。 通过分析这些材料的观察值与预期值,确定用于报告 IS 的 BCR-ABL1 测定的校正因子。




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